הפטיטיס C היא זיהום בכבד הנגרמת על ידי וירוס Flaviviridae HCV, המורכב ממולקולת RNA אחת או יותר. ככלל, ננקטות סדרה של אמצעי אבחון לביסוס הפטיטיס C בחולה. PCR הוא ניתוח המאשש במדויק את האבחנה. לעתים קרובות המסקנה מסופקת על ידי רופאים כאשר למטופל כבר יש את הסימנים הראשונים של המחלה.
מהי הפטיטיס C
פגיעה בכבד על ידי זיהום ויראלי המועבר באמצעות דם או מגע מיני נקרא ברפואה הפטיטיס C. הגורם הסיבתי הוא וירוס המכיל RNA של גורמים זיהומיים לא-תאיים ממשפחת ה- Flaviviridae. הזיהום יכול להישאר בגוף במשך זמן רב מבלי להראות את עצמו. לכן, רק כאשר מתגלה מיקרואורגניזם באמצעות בדיקת דם באמצעות PCR RNA RNA, הפטיטיס C (כאבחנה) נחשבת מוצדקת.
Flavivirus אינו מיוצר בתאים מבודדים שגדלו באופן מלאכותי. בתהליך הרבייה, הגורם הזיהומי יוצר שינויים מובחנים מבחינה אימונולוגית. גורמים אלו מונעים מהגוף לתתתגובה הגנה מתאימה, ומומחים מתקשים בפיתוח חיסון יעיל.
הנגיף מועבר באופן פרנטרלי. לזיהום, עליו להיכנס בכמות מספקת ישירות לזרם הדם.
אילו בדיקות נעשות עבור הפטיטיס C
פתולוגיות ויראליות של הכבד מאובחנות באמצעות בדיקות מעבדה. מחקרים קליניים של הפטיטיס C מבוצעים על ידי חקר אנטיגנים זרים ומסוכנים או תרכובות חלבון (נוגדנים) בחומר הביולוגי של החולה, בעיקר בדם.
- בדיקה חיסונית אנזימטית (ELISA). השיטה מבוססת על איתור נוגדני lgM בדם. אימונוגלובולין נחשב לגדול ביותר והוא פנטמר. זה מתבטא בתגובת ההגנה העיקרית של לימפוציטים לחומר זר לא ידוע.
- Radioimmunoassay (RIA) - קביעה כמותית של אימונוגלובולין lgM באמצעות איזוטופ רדיואקטיבי מסומן של יוד.
- PCR של הפטיטיס C - קביעת RNA ויראלי בחומר הביולוגי (דם). ניתוח זה מאשר באופן מהימן את האבחנה.
בדיקת IgG אינה אמינה. נוכחותו בנסיוב הדם יכולה להעיד לא רק על נוכחות של וירוס פלווי, אלא גם על זיהום עבר אחר בעל אותו פתוגן.
מה קובע ניתוח PCR
תגובת שרשרת פולימראז (PCR) מבוססת על זיהוי אזורי DNA ספציפיים לפתוגנים מסוימים בדגימות של חומר למחקר (אפיתל, דם).הניתוח מאפשר לזהות את האורגניזמים הקטנים ביותר (וירוסים) פתוגניים על ידי זיהוי ה-RNA או ה-DNA שלהם בחומר ביולוגי.
הליך מעבדה לאיתור נוגדנים הפטיטיס C PCR מתבצע בשלושה שלבים:
- בחר. החומר הביולוגי הנחקר מטוהר מזיהומים וה-DNA מתקבל בשלב הנייד של העמודה הכרומטוגרפית.
- הגברה. הניתוח מתבצע במחזור מכשיר-טרמוסטט. הוא מחמם ומקרר את המבחנות במחזוריות מסוימת. עבור מחקר אחד, מתבצעים עד 35 מחזורים. התוצאה היא מספר מספיק של שברי DNA כדי לזהות, לזהות ולהעריך את הפתוגן.
- אלקטרופורזה. השברים המתקבלים ממוקמים בג'ל עם רוויה שונה של agarose ומבוצעת אלקטרופורזה. האלקטרופרוגרמה המתקבלת מנותחת במחשב.
לא רק נעשה שימוש במחקר ה-PCR הסטנדרטי, אלא גם בניתוח ה-PCR בזמן אמת. זהו אבחון בזמן אמת. השיטה מאפשרת ניתוח איכותי וכמותי, המאפשר לזהות את היווצרות המחלה ואת הדינמיקה, כמו גם לקבוע טיפול שמטרתו ביטול הגורם למקור הפתולוגיה. PCR בזמן אמת משמש גם לקביעת תרבות טהורה של גורמים זיהומיים (גנוטייפ).
איך מתבצעת בדיקת תגובת שרשרת הפולימראז
לאבחנה, ניתן להשתמש בכל נוזל ביולוגי אנושי. חומר ביולוגי לבדיקת הפטיטיס C הוא בדרך כלל דם.
הדגימה לאבחון מתבצעת בנוהלמִשׂרָד. כדי לקחת דם יש להשתמש במבחנות חד פעמיות עם חומר המעכב קרישת דם. פעילויות המתמקדות במניעת התפשטות גורמים מדבקים עוזרות להימנע מכניסה של זן אחר של מיקרואורגניזמים מבחוץ.
דם עבור PCR של הפטיטיס C נלקח בבוקר על קיבה ריקה. הדגימה נשלחת מיד למעבדה. מותר לאחסן את הביוחומר בטמפרטורה של +4 עד +8 מעלות צלזיוס. מיכלים מסומנים בתווית ומסופקים עם הנחיות. תוצאות הבדיקה זמינות תוך 48 שעות, לפעמים מוקדם יותר.
סוגי PCR
טווח היישום של תגובת שרשרת הפולימראז הוא די רחב. זיהומים קובעים באמצעות PCR הפטיטיס B, מחלות המועברות על ידי חרקים מוצצי דם, איידס, שחפת. באונקולוגיה, בשיטה זו, תאי גידול מתגלים בשלב מוקדם.
יש כארבעה עשר סוגי ניתוח. השימוש בסוג כזה או אחר תלוי בהיקף ובתוצאות הסופיות של הניתוחים. סוגים מסוימים של PCR הם הכרחיים כאשר התוצאה נחוצה תוך 20 דקות.
כדי לאבחן הפטיטיס C, משתמשים ב-3 סוגים של תגובת שרשרת פולימראז:
- הערכה האיכותית יכולה להיות חיובית, המעידה על נוכחות של זיהום בגוף, או שלילית, המעידה על היעדר נגיף פלווי.
- -PCR בזמן אמת (ניתוח כמותי) - קובע את ה-RNA הכמותי של הפתוגן ב-IU/ml.
- Genotyping הוא ניתוח החושף את הסוג (גנוטיפ) של הנגיף.
כדי לזהות ולקבוע במדויק את המחלה, ואחריהכל שלושת סוגי המחקרים משמשים לרשום טיפול מיטבי.
ניתוח תגובת שרשרת פולימראז איכותי
ניתוח חובה לכל מי שיש לו ELISA שזיהה נוגדנים ל-HCV. ה-PCR האיכותי להפטיטיס C הוא מבחן הרגישות הסטנדרטי. השיטה מכוונת רק לגילוי, לא מתבצעת ספירה או בידוד של חומרים אחרים.
כדי לזהות נוגדנים, נעשה שימוש במערכות בדיקה מיוחדות עם סף רגישות של לפחות 50 IU/ml. אם מתגלים נוגדנים, נקבעו בדיקות הבהרה אחרות. אם התוצאה שלילית, לא יבוצעו בדיקות נוספות.
במקרים מסוימים, תוצאה שלילית כוזבת עשויה להיות עקב צוות מעבדה לא כשיר או מגיבים באיכות ירודה. לביטוח, עדיף לחזור על הניתוח במקום אחר.
PCR כמותי
השיטה משמשת כדי לחקור ישירות את מספר ה-flavivirus במחזור תגובה אחד. למדידה מדויקת, נעשה שימוש בשברי DNA המשמשים להכלאה או בפריימרים עם תיוג ניאון. קיימת אפשרות זיהוי חסכונית באמצעות צבע SYBL Green. הצבע נדחס לתוך חריץ קטן ב-DNA והופך לכחול בעת הקרנה בלייזר.
הריכוז נקבע על ידי המגבר-המכשיר בשקול דיגיטלי. הערכים עשויים להשתנות מעט בין מעבדות ולכן יש להשוות אותם עם ערכי ייחוס.
PCR כמותיהפטיטיס C עוזר לבחור את המינון האופטימלי של תרופות ולקבוע את משך הטיפול. תדירות המחקר תלויה בשלב המחלה, סוג הגנוטיפ ומהלך הטיפול שנקבע.
קביעת גנוטיפ
לנגיף הפטיטיס C יש מבנה גנטי משתנה. שינויים רבים לא מאפשרים ליצור חיסון, וגם מסבכים את הטיפול. בסך הכל זוהו ונרשמו 11 גנוטיפים ו-100 תתי סוגים. במדינות ברית המועצות לשעבר, באנשים שנדבקו בהפטיטיס C, PCR מזהה בעיקר את הגנוטיפים 1b ו-3.
בנוכחות של כל אחד מהגנוטיפים, שחמת או סרטן הכבד יכולים להשתולל. לכן כל כך חשוב לזהות את הנגיף בזמן.
עבור חלק מהמטופלים, תרופות מסוימות המיועדות להילחם ב-HCV הן רעילות. גנוטייפ מאפשר לך לקבוע את סוג החלבון ולרשום תרופה יעילה.
בתוצאות של בדיקות ההקלדה יש מספר עם אות לטינית קטנה המציינת את הגנוטיפ של הנגיף. אם HCV מזוהה אך לא מוקלד, זה אומר שלאדם יש גנוטיפ שאינו אופייני לאזור גיאוגרפי מסוים.
תוצאות ניתוח
הרופא עוסק בפענוח התוצאות. רק נתונים ממספר מחקרים (יחד עם אנמנזה ובדיקה) יכולים לתת תמונה אמיתית כוללת של ההיסטוריה הרפואית.
- באדם בריא, בדיקה לתגובה איכותית בחומר הביולוגי לא מזהה כלום. אם הערך "זהה" מצוין, הזיהום מאושר, והמטופלזקוק לאבחון נוסף ולאחריו טיפול.
- קביעת מספר הגורמים המדבקים מאפשרת להעריך את העומס הנגיפי על הגוף. בדרך כלל, PCR כמותי של הפטיטיס C אינו מזהה את הפתוגן. אינדיקטור של עד 810^5 נחשב לעומס נמוך, ועם טיפול מתאים מבטיח תוצאה חיובית. ערכים גבוהים יותר מצריכים בחינה מעמיקה וקביעת טיפול ארוך טווח, שעל תוצאותיה החיוביות איש אינו יכול להעיד.
- תוצאות גנוטיפ חיוביות מצביעות על איזה גנוטיפ מוכר. תוצאה שלילית מצביעה על היעדר flavivirus או על נוכחות של גנוטיפ שאינו אופייני לאזור זה.
מה מעידה בדיקת PCR חיובית
כל מחלה רצינית דורשת אבחנה מקיפה. PCR חיובי של הפטיטיס C מאשר את האבחנה, אך ניתן לבצע תחזיות רק לאחר מחקרים מעבדתיים ומכשירים נוספים.
זיהוי של וירוס אינו נותן תמונה מלאה של הפתולוגיה. יש צורך לזהות את סוגו ומהותו, כדי לקבוע כיצד הוא משפיע על הכבד ואיברים אחרים. לגילוי מוקדם של HCV יש לרוב תוצאה טיפולית חיובית.
PCR שלילי עם ELISA חיובי
כאשר צופים בתסמינים האופייניים לנזק לכבד, ישנה סבירות גבוהה שהזיהום כבר חדר לגוף. לכן יש לפנות לרופא הפטולוג או למומחה למחלות זיהומיות. במהלך הראיונות, המומחה יאסוף אנמנזה וירשום את הבדיקה הדרושה.
אםהתוצאות של מחקרים על הפטיטיס C PCR שליליות, ובדיקת האנזים החיסונית חיובית, זה מצביע על נוכחות של נוגדנים ל-flavivirus בדם. זה קורה בדרך כלל כאשר הזיהום חודר לגוף בכמות קטנה, כך שמערכת החיסון התמודדה עם זה בעצמה. אבל אנשים כאלה עדיין נחשבים נגועים ונדרשים להיבדק כל 6 חודשים. אם עם תוצאות בדיקה כאלה סורבה מאדם בדיקה רפואית חינם, עדיף לקחת PCR תמורת תשלום לשמירה על הבריאות, ואם התוצאות חיוביות לפנות למומחה לאבחון וטיפול.
יתרונות וחסרונות השיטה
כאשר מבססים את האבחנה של הפטיטיס C, ל-PCR יש מספר יתרונות:
- זיהוי מוקדם של פתוגן.
- הגדרה מדויקת של הנגיף.
- יעילות האבחון.
- שיעור שגיאות מינימלי.
- רגישות גבוהה.
חסרונות השיטה:
- עלות ניתוח גבוהה. הבדיקה דורשת ציוד יקר, ריאגנטים וצוות רפואי מוסמך במיוחד. הכל ביחד מסתכם בסכום ניכר.
- דרישות מחמירות להובלת חומר ביולוגי.
טיפול בדלקת בכבד
ניתוח PCR עבור וירוס הפטיטיס C נחשב בסיסי לאבחון, אך אינו סופי. כדי שהטיפול יהיה יעיל, נדרשים מספר מחקרים מעבדתיים ומכשירים נוספים. אחרי שעבר הכלאמצעי אבחון שהרופא רושם טיפול:
- דיאטה מס' 5 נקבעה.
- אלכוהול אינו נכלל לחלוטין.
- קבלה משותפת של אינטרפרון וריבאווירין למשך 25 ימים.
- קורסים של מגיני כבד "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- במקרים מיוחדים, נעשה שימוש בפלאזפרזה בדידה.
בתרופות שנקבעו על ידי רופא הפטולוג נעשה שימוש קבוע, מבלי לשנות את המינון. משך נטילת התרופות נקבע על ידי הרופא לאחר מעבר בדיקות הביקורת. לאחר השלמת מהלך הטיפול, עליך לבקר את הרופא כל שישה חודשים.
PCR-diagnostics מאפשר לזהות את הגורם הסיבתי של הפטיטיס C בשלב מוקדם. זה תורם ליעילות הטיפול ולמניעת המעבר של המחלה לצורות מסוכנות כמו שחמת כבד וקרצינומה של הכבד.
