אבחון מעבדה של כמעט כל המחלות הזיהומיות מבוסס על זיהוי של נוגדנים בדם החולה, המיוצרים כנגד האנטיגנים של הפתוגן, בשיטות של תגובות סרולוגיות. הם נכנסו לרפואה מסוף המאה התשע עשרה עד תחילת המאה העשרים.
פיתוח המדע עזר לקבוע את המבנה האנטיגני של חיידקים ואת הנוסחאות הכימיות של הרעלים שלהם. זה איפשר ליצור לא רק סרה טיפולית, אלא גם אבחנתית. הם מתקבלים על ידי מתן פתוגנים מוחלשים לחיות מעבדה. לאחר מספר ימים של חשיפה, משתמשים בדם של ארנבות או עכברים להכנת תכשירים המשמשים לזיהוי חיידקים או רעלנים שלהם באמצעות בדיקות סרולוגיות.
הביטוי החיצוני של תגובה כזו תלוי בתנאי ההגדרה שלה ובמצב האנטיגנים בדם החולה. אם חלקיקים חיידקיים אינם מסיסים, הם משקעים, מתמזגים, נקשרים או משתתקים בסרום. אם האנטיגנים מסיסים, אז מופיעה תופעת הנטרול או המשקעים.
תגובת צבירה (RA)
בדיקת האגלוטינציה הסרולוגית היא מאוד ספציפית. זה קל לביצוע ודיחזותי, כדי לקבוע במהירות את נוכחותם של אנטיגנים בסרום הדם של המטופל. הוא משמש לבדיקת תגובת וידאל (אבחון של קדחת טיפוס ופארטיפוס) וויגל (קדחת טיפוס).
זה מבוסס על אינטראקציה ספציפית בין נוגדנים אנושיים (או אגלוטינינים) ותאים מיקרוביאליים (אגלוטנוגנים). לאחר האינטראקציה ביניהם, נוצרים חלקיקים המשקעים. זהו סימן חיובי. ניתן להשתמש בחומרים חיידקים חיים או מומתים, פטריות, פרוטוזואה, תאי דם ותאים סומטיים כדי להגדיר את התגובה.
מבחינה כימית, התגובה מחולקת לשני שלבים:
- חיבור ספציפי של נוגדנים (AT) עם אנטיגנים (AG).
- לא ספציפי - משקעים של קונגלומרטים של AG-AT, כלומר, היווצרות של אגלוטינט.
תגובת צבירה עקיפה (IPHA)
תגובה זו רגישה יותר מהקודמת. הוא משמש לאבחון מחלות הנגרמות על ידי חיידקים, טפילים תוך תאיים ופרוטוזואה. זה כל כך ספציפי שאפשר לזהות אפילו ריכוזים נמוכים מאוד של נוגדנים.
אריתרוציטים של כבשים מטוהרים ותאי דם אדומים אנושיים שטופלו מראש בנוגדנים או אנטיגנים משמשים לייצורם (תלוי במה שהטכנאי רוצה למצוא). במקרים מסוימים, תאי דם אדומים אנושיים מטופלים באימונוגלובולינים. תגובות סרולוגיות של אריתרוציטים נחשבות כאילו התרחשו אם הם התיישבו בתחתית הצינור. לגבי תגובה חיוביתנגיד כאשר התאים מסודרים בצורה של מטריה הפוכה, התופסת את כל התחתית. תגובה שלילית נספרת אם האריתרוציטים התמקמו בעמודה או בצורת כפתור במרכז התחתית.
תגובת משקעים (RP)
תגובות סרולוגיות מסוג זה משמשות לאיתור חלקיקים קטנים במיוחד של אנטיגנים. אלה יכולים להיות, למשל, חלבונים (או חלקים מהם), תרכובות של חלבונים עם שומנים או פחמימות, חלקים של חיידקים, הרעלים שלהם.
סרה לתגובה מתקבלת על ידי הדבקה מלאכותית של בעלי חיים, בדרך כלל ארנבות. בשיטה זו, אתה יכול לקבל לחלוטין כל סרום משקע. ההגדרה של תגובות משקעים סרולוגיות דומה במנגנון הפעולה לתגובות אגלוטינציה. נוגדנים הכלולים בסרום מתחברים עם אנטיגנים בתמיסה קולואידית, ויוצרים מולקולות חלבון גדולות המופקדות על תחתית הצינור או על המצע (ג'ל). שיטה זו נחשבת ספציפית ביותר ויכולה לזהות אפילו כמויות זניחות של חומר.
משמש לאבחון מגיפה, טולרמיה, אנתרקס, דלקת קרום המוח ומחלות אחרות. בנוסף, הוא מעורב בבדיקה רפואית משפטית.
תגובת משקעים ג'ל
תגובות סרולוגיות יכולות להתבצע לא רק במדיום נוזלי, אלא גם בג'ל אגר. זה נקרא שיטת המשקעים המפוזרים. בעזרתו נחקר ההרכב של תערובות אנטיגניות מורכבות. שיטה זו מבוססת על כימוטקסיס של אנטיגנים לנוגדנים ולהיפך. בג'ל הם זזיםאחד כלפי השני במהירויות שונות ובמפגש יוצרים קווי משקעים. כל שורה היא קבוצה אחת של AG-AT.
תגובת ניטרול אקזוטוקסין עם נוגד רעלן (PH)
סרומים אנטי רעילים מסוגלים לנטרל את פעולת האקזוטוקסין המיוצר על ידי מיקרואורגניזמים. תגובות סרולוגיות אלו מבוססות על כך. המיקרוביולוגיה משתמשת בשיטה זו על מנת לטיטר סמים, רעלים וטוקסואידים ולקבוע את פעילותם הטיפולית. כוחו של נטרול רעלנים נקבע על ידי יחידות קונבנציונליות - AE.
בנוסף, הודות לתגובה זו, ניתן לקבוע את המין או סוג האקסוטוקסין. זה משמש לאבחון של טטנוס, דיפתריה, בוטוליזם. ניתן לבצע את המחקר גם "על זכוכית" וגם בג'ל.
תגובת תמוגה (RL)
לנסיוב החיסוני, החודר לגוף המטופל, יש, בנוסף לתפקידו העיקרי של חסינות פסיבית, גם תכונות ליזה. הוא מסוגל להמיס סוכנים מיקרוביאליים, אלמנטים זרים סלולריים ווירוסים החודרים לגוף המטופל. בהתאם לספציפיות של הנוגדנים הכלולים בסרום, מבודדים בקטריוליזינים, ציטוליזינים, ספירוצ'טוליזינים, המוליזינים ואחרים.
נוגדנים ספציפיים אלה נקראים "משלים". הוא נמצא כמעט בכל נוזלי הגוף האנושיים, בעל מבנה חלבוני מורכב והוא רגיש ביותר לעליית טמפרטורה, רעידות, חומצות ואור שמש ישיר. אבל במצב מיובש הוא מסוגל לשמורתכונות הליזה שלו עד שישה חודשים.
ישנם סוגים אלה של תגובות סרולוגיות מסוג זה:
- בקטריוליזה;
- המוליזה.
Bacteriolysis מתבצע באמצעות סרום הדם של המטופל וסרום חיסון ספציפי עם חיידקים חיים. אם קיים מספיק משלים בדם, החוקר יראה את החיידק מתפרק, והתגובה תיחשב חיובית.
התגובה הסרולוגית השנייה של הדם היא שתרחיף של תאי הדם האדומים של המטופל מטופל בסרום המכיל המוליזינים, המופעלים רק בנוכחות מחמאה מסוימת. אם יש כזה, אז עוזר המעבדה צופה בהתמוססות של תאי דם אדומים. תגובה זו נמצאת בשימוש נרחב ברפואה המודרנית כדי לקבוע את טיטר המשלים (כלומר, הכמות הקטנה ביותר שלו המעוררת תמוגה של אריתרוציטים) בסרום הדם ולביצוע ניתוח לקיבוע משלים. בדרך זו מתבצעת בדיקה סרולוגית לאיתור עגבת - תגובת וסרמן
תגובת קיבוע משלימה (CFR)
תגובה זו משמשת לאיתור נוגדנים לגורם זיהומי בסרום הדם של החולה, וכן לזיהוי הפתוגן לפי המבנה האנטיגני שלו.
עד לנקודה זו, תיארנו תגובות סרולוגיות פשוטות. RSK נחשבת לתגובה מורכבת, שכן לא שניים אלא שלושה אלמנטים מקיימים בה אינטראקציה: נוגדן, אנטיגן ומשלים. המהות שלה טמונה בעובדה שהאינטראקציה בין הנוגדן לאנטיגןמתרחשת רק בנוכחות חלבונים משלימים, הנספגים על פני השטח של קומפלקס AG-AT שנוצר.
האנטיגנים עצמם, לאחר תוספת משלים, עוברים שינויים משמעותיים, שמראים את איכות התגובה. זה יכול להיות תמוגה, המוליזה, immobilization, פעולה קוטל חיידקים או בקטריוסטטי.
התגובה עצמה מתרחשת בשני שלבים:
- יצירת קומפלקס אנטיגן-נוגדנים שאינו נראה חזותית לבודק.
- שינוי באנטיגן בפעולת המשלים. לרוב ניתן לאתר שלב זה בעין בלתי מזוינת. אם התגובה אינה נראית לעין, אזי נעשה שימוש במערכת חיווי נוספת לזיהוי שינויים.
מערכת מחוון
תגובה זו מבוססת על קיבוע משלים. אריתרוציטים מטוהרים של ראם וסרום המוליטי נטול משלים מתווספים למבחנה שעה לאחר קביעת ה-RSC. אם יישאר במבחנה משלים לא קשור, אז הוא יצטרף לקומפלקס AG-AT שנוצר בין תאי דם של כבשים להמוליזין, ויגרום להמסתם. זה אומר ש-RSK שלילי. אם האריתרוציטים נותרו שלמים, אזי, בהתאם, התגובה חיובית.
בדיקת ההמגלוטינציה (RGA)
ישנן שתי תגובות hemagglutination שונות מהותית. אחד מהם הוא סרולוגי, הוא משמש לקביעת קבוצות דם. במקרה זה, תאי דם אדומים מקיימים אינטראקציה עם נוגדנים.
והשניהתגובה אינה חלה על סרולוגי, שכן תאי דם אדומים מגיבים להמגלוטינינים המיוצרים על ידי וירוסים. מכיוון שכל פתוגן פועל רק על אריתרוציטים ספציפיים (עוף, כבש, קוף), תגובה זו יכולה להיחשב ספציפית ביותר.
ניתן לדעת אם תגובה חיובית או שלילית לפי מיקום תאי הדם בתחתית המבחנה. אם הדפוס שלהם דומה למטריה הפוכה, אז הנגיף הרצוי קיים בדמו של המטופל. ואם כל האריתרוציטים נוצרו כמו עמודת מטבעות, אז אין פתוגנים רצויים.
בדיקת עיכוב ההמגלוטינציה (HITA)
זוהי תגובה מאוד ספציפית המאפשרת לך לקבוע את סוג, סוג הנגיפים או נוכחותם של נוגדנים ספציפיים בסרום הדם של המטופל.
המהות שלו טמונה בעובדה שהנוגדנים שנוספו למבחנה עם חומר הבדיקה מונעים שקיעת אנטיגנים על אריתרוציטים, ובכך מפסיקים את ההמגלוטינציה. זהו סימן איכותי לנוכחות בדם של אנטיגנים ספציפיים עבור הנגיף הספציפי שמחפשים.
תגובה חיסונית פלואורסצנטית (RIF)
התגובה מבוססת על היכולת לזהות קומפלקסים של AG-AT במיקרוסקופ פלואורסצנטי לאחר הטיפול שלהם בצבעי פלואורכרום. שיטה זו קלה לטיפול, אינה דורשת בידוד של תרבות טהורה ולוקחת מעט זמן. זה הכרחי לאבחון מהיר של מחלות זיהומיות.
בפועל, התגובות הסרולוגיות הללו מתחלקות לשני סוגים: ישירות ועקיפות.
Direct RIF מיוצר מאנטיגן, אשר מטופל מראש בסרום ניאון. והעקיף הוא שקודם כל התרופה מטופלת באבחון קונבנציונלי המכיל אנטיגנים לנוגדנים המעניינים, ולאחר מכן מורחים מחדש את הסרום הזוהר, הספציפי לחלבונים של קומפלקס AG-AT, ותאים מיקרוביאליים. להיות גלוי במיקרוסקופיה.
