לאחרונה פותחה שיטה אמינה, רגישה ומהירה ביותר לאבחון מחלות זיהומיות שונות של בני אדם. שיטה זו נקראת "ניתוח PCR". מה זה, מה המהות שלו, אילו מיקרואורגניזמים זה יכול לחשוף ואיך לקחת את זה נכון, נספר במאמר שלנו.
היסטוריית גילוי
המציא את שיטת תגובת שרשרת הפולימראז (PCR) על ידי המדען האמריקאי קארי מוליס בשנת 1983. בתחילה, שיטת האבחון נרשמה כפטנט על ידי תאגיד Cetus, בו עבד יוצרה. אבל ב-1992, כל הזכויות והפטנטים נמכרו להופמן-לה רוש. לאחר מכן התברר שמחקרים דומים בוצעו במקביל ותועדו על ידי ביולוגים אמריקאים נוספים, כמו אליס צ'ן, דיוויד אדגר, ג'ון טרל. ב-1980 עסקו בבעיה זו גם המדענים הסובייטים א' סליוסרנקו, א' קאלדין וס' גורודצקי. לכן, אי אפשר היה לקבוע את בעל זכויות היוצרים היחיד. ביוכימאים בולטים רבים תרמו תרומה מסוימת לפיתוח טכניקת תגובת שרשרת הפולימראז ורשמו פטנט על החידושים שלהם. כרגע, הניתוחPCR מתבצע בכל מקום במעבדות מאובזרות במיוחד.
מהות שיטת האבחון PCR
ניתוח PCR: מה זה ואיך זה עובד? מהות השיטה היא הגדלת נפח של סביבה מיקרוביאלית מסוימת בתנאים מלאכותיים באמצעות אנזים DNA פולימראז מיוחד. לשם כך, חומר ה-DNA הקיים מוכפל פעמים רבות. כך, בנוכחות מיקרואורגניזם פתוגני בדגימה, כמותו תגדל עקב מניפולציות מעבדה ביוכימיות, ולא יהיה קשה לזהות את החיידק במיקרוסקופ.
איך מתבצע מחקר חומרי?
נדרש לניתוח:
- מטריצת DNA;
- primers המחברים את הקצוות של פיסת חומר;
- אנזים DNA פולימראז עמיד בחום;
- כימיקלים שגורמים לאנזימים לעבוד כמו שצריך;
- פתרון חיץ הכרחי ליצירת התנאים המתאימים לצמיחה והתפתחות של חומר DNA.
לביצוע PCR מבוצעות 25-30 חזרות, המורכבות משלושה שלבים: דנטורציה, חישול והתארכות.
לניתוח תגובת השרשרת הפולימרית משתמשים במכשיר מיוחד - מגבר. ציוד מודרני מאפשר לך להגדיר את התוכנית הדרושה לצינורות חימום וקירור כדי למנוע שגיאות במהלך האבחון.
היכן משתמשים באבחון?
שיטת תגובת השרשרת הפולימרית משמשת בתחומים שונים של רפואה:
- פושעים עםהוא מזהה חומר גנטי כגון שיער, רוק או דם;
- בדיקת דם PCR עוזרת לגנוטיפ, למשל, לזהות תגובה גנטית אינדיבידואלית לתרופה מסוימת;
- שימוש בשיטה זו כדי לבסס את נוכחותם של קשרי משפחה בין אנשים;
- שיטת ה-PCR הפופולרית ביותר הפכה באבחון רפואי לקביעת מחלות זיהומיות שונות.
אילו זיהומים מזהה PCR?
אז, הרפואה השתמשה זמן רב ומוצלח בניתוח PCR. מה זה, אנחנו כבר יודעים. ואיזה פתוגנים ניתן לזהות איתו? המחלות הזיהומיות הבאות מאובחנות בשיטת PCR:
- הפטיטיס A, B, C;
- ureaplasmosis;
- קנדידיאזיס;
- chlamydia;
- mycoplasmosis;
- gardnerelosis;
- מונונוקלאוזיס זיהומיות;
- trichomoniasis;
- זיהום בנגיף הפפילומה;
- שחפת;
- הרפס סוגים 1 ו-2;
- helicobacteriosis;
- cytomegalovirus;
- diphtheria;
- salmonelosis;
- הדבקה ב-HIV.
כמו כן, נעשה שימוש בשיטות PCR באבחון סרטן.
הטבות של השיטה
לאבחון PCR יש כמה יתרונות:
- רגישות גבוהה. אפילו בנוכחות רק כמה מולקולות של DNA של מיקרואורגניזם, ניתוח PCR קובע את נוכחות הזיהום. השיטה תסייע במחלות כרוניות ומופיעות בסמויה. לעתים קרובות במקרים כאלה, המיקרואורגניזםאחרת לא ניתן לעיבוד.
- כל חומר מתאים למחקר, כגון רוק, דם, הפרשות איברי המין, שיער, תאי אפיתל. הנפוץ ביותר הוא ניתוח של מריחת דם ומריחה אורוגנית ל-PCR.
- לא נדרש חיתוך לטווח ארוך. תהליך האבחון האוטומטי מאפשר לך לקבל את תוצאות המחקר לאחר 4-5 שעות.
- השיטה אמינה כמעט ב-100%. רק מקרים בודדים של תוצאות שליליות כוזבות נרשמו.
- היכולת לזהות מספר סוגים של פתוגנים מדגימת חומר בודדת. זה לא רק מזרז את תהליך אבחון המחלה, אלא גם מפחית משמעותית את עלויות החומר. לעתים קרובות הרופא רושם ניתוח PCR מקיף. מחיר הבדיקה, המורכבת מקביעת שישה פתוגנים, הוא כ-1,500 רובל.
המלצות להתכונן לניתוח
כדי שהתוצאות יהיו אמינות במהלך מחקר ה-PCR, עליך לעבור את הבדיקה, בהתאם להמלצות להכנה מקדימה לאבחון:
- לפני תרומת רוק, עליך להימנע מאכילה ונטילת תרופות 4 שעות לפני הדגימה. מיד לפני ההליך, שטפו את הפה במים רתוחים.
- יש להקפיד על הכללים שלעיל גם כאשר לוקחים דגימה מהמשטח הפנימי של הלחי. לאחר השטיפה, מומלץ לבצע עיסוי עור קל להדגשת הפרשת הבלוטה.
- שתן נאסף בדרך כלל בבית. כדי לעשות זאת, אתה צריך לנהל שירותים יסודיאֵיבְרֵי הַמִין. אסוף 50-60 מ"ל שתן במיכל פלסטיק סטרילי. כדי להבטיח את טוהר החומר, מומלץ לנשים להחדיר טמפון לנרתיק ולגברים למשוך כמה שיותר את קפל העור לאחור. אל תתרום במהלך המחזור שלך.
- כדי לתרום זרע, עליך להימנע מקיום יחסי מין במשך 3 ימים לפני הדגימה. הרופאים ממליצים גם לא לבקר בסאונה ולעשות אמבטיה חמה, שתיית אלכוהול ואוכל חריף. עליך להימנע ממתן שתן 3 שעות לפני הבדיקה.
- כדי לקחת כתם אורוגניטלי, למשל, אם מבוצעת בדיקת PCR לכלמידיה, מומלץ לנשים ולגברים לנוח מינית למשך 3 ימים. אין ליטול תרופות אנטיבקטריאליות שבועיים לפני הניתוח. במשך שבוע, אתה צריך להפסיק להשתמש ג'לים אינטימיים, משחות, נרות נרתיקיות, שטיפה. 3 שעות לפני הבדיקה יש להימנע ממתן שתן. בזמן הווסת לא מתבצעת דגימה, רק 3 ימים לאחר הפסקת הפרשות הדם ניתן לבצע כתם אורוגניטלי.
PCR במהלך ההריון
בתקופת הציפייה לתינוק, זיהומים רבים המועברים במגע מיני מסוכנים ביותר להתפתחות תקינה של העובר. מחלות מין יכולות לעורר פיגור בגדילה תוך רחמית, הפלה או לידה מוקדמת, מומים מולדים של הילד. לכן, חשוב ביותר לעבור בדיקת PCR בתחילת ההריון. יש צורך להעביר את הניתוח עם ההרשמה - עד 12 שבועות.
החומר נלקח מתעלת צוואר הרחם באמצעות מברשת מיוחדת. ההליך אינו כואב ואינו מהווה סכנה לתינוק. בדרך כלל במהלך ההריון, ניתוח מתבצע עבור כלמידיה בשיטת PCR, כמו גם עבור ureaplasmosis, mycoplasmosis, cytomegalovirus, הרפס, papillomavirus. מכלול בחינות כזה נקרא PCR-6.
PCR לאבחון HIV
בשל העובדה ששיטת תגובת שרשרת הפולימראז רגישה מאוד לשינויים בגוף ולתנאי האבחון, גורמים רבים יכולים להשפיע על התוצאה. לכן, ניתוח PCR לזיהום ב-HIV אינו שיטה אמינה, היעילות שלה היא 96-98%. ב-2-4% הנותרים מהמקרים, הבדיקה נותנת תוצאות חיוביות שגויות.
אבל במצבים מסוימים, אבחון PCR של HIV הוא הכרחי. זה ניתן בדרך כלל לאנשים עם תוצאת ELISA שגויה-שלילית. אינדיקטורים כאלה מצביעים על כך שאדם עדיין לא פיתח נוגדנים לנגיף ולא ניתן לזהות אותם ללא עלייה מרובה במספר. זה בדיוק מה שניתן להשיג על ידי ביצוע בדיקת דם PCR.
אבחונים אלו נחוצים גם לילדים בשנה הראשונה לחייהם שנולדו מאם נשאית HIV. השיטה היא הדרך היחידה לקבוע באופן מהימן את הסטטוס של ילד.
PCR לאבחון הפטיטיס
שיטת תגובת שרשרת הפולימראז מאפשרת לזהות את ה-DNA של נגיף ההפטיטיס A,B,C הרבה לפני היווצרות נוגדנים לזיהום או הופעת תסמיני המחלה. ניתוח PCR עבור הפטיטיס C יעיל במיוחד, שכן ב-85% מהמקרים מחלה זו היא א-סימפטומטית וללאטיפול בזמן נכנס לשלב הכרוני.
איתור בזמן של הפתוגן יעזור למנוע סיבוכים וטיפול ארוך טווח.
בדיקת PCR מקיפה
ניתוח PCR מורכב: מה זה? מדובר בבדיקה בשיטת תגובת שרשרת פולימרית הכוללת קביעת מספר סוגי זיהומים בו זמנית: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes type 1 and 2, gonorrhea, papillomavirus. המחיר של אבחון כזה נע בין 2000 ל 3500 רובל. בהתאם למרפאה, החומרים והציוד בהם נעשה שימוש, וכן בסוג הניתוח: איכותי או כמותי. מה שצריך במקרה שלך - הרופא יחליט. במקרים מסוימים, זה מספיק רק כדי לקבוע את נוכחות הפתוגן, באחרים, למשל, עם זיהום HIV, טיטר כמותי ממלא תפקיד חשוב. כאשר מאבחנים את כל הפתוגנים הנ"ל, הבדיקה נקראת "ניתוח PCR-12".
תמלול תוצאות הניתוח
פענוח ניתוח ה-PCR אינו קשה. יש רק 2 סולמות של המחוון - "תוצאה חיובית" ו"תוצאה שלילית". כאשר מתגלה פתוגן, הרופאים יכולים לאשר את נוכחות המחלה בוודאות של 99% ולהתחיל לטפל בחולה. עם שיטה כמותית לקביעת זיהום, העמודה המתאימה תציין את האינדיקטור המספרי של חיידקים שזוהו. רק רופא יכול לקבוע את היקף המחלה ולרשום את הטיפול הדרוש.
במקרים מסוימים, למשל, בעת קביעת הדבקה ב-HIV באמצעות PCR, עם תוצאה שלילית, יש צורך לבצע בדיקות נוספות כדי לאשר את האינדיקטורים שהושגו.
היכן להיבחן?
היכן לבצע בדיקת PCR: במרפאה ציבורית או במעבדה פרטית? למרבה הצער, במוסדות רפואיים עירוניים, הציוד והשיטות לרוב מיושנים. לכן, עדיף לתת עדיפות למעבדות פרטיות עם ציוד מודרני וכוח אדם מוסמך מאוד. בנוסף, בקליניקה פרטית תקבלו תוצאות הרבה יותר מהר.
במוסקווה, מעבדות פרטיות רבות מציעות ניתוח PCR עבור זיהומים שונים. לדוגמה, במרפאות כמו Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, מתבצע ניתוח PCR. מחיר הבדיקה הוא מ-200 רובל. לזיהוי פתוגן אחד.
ניתן להסיק שאבחון מחלות זיהומיות באמצעות PCR ברוב המקרים הוא דרך מהירה ואמינה לזיהוי הפתוגן בגוף בשלבי ההדבקה המוקדמים. אבל בכל זאת, במקרים מסוימים, כדאי לבחור בשיטות אבחון אחרות. רק מומחה יכול לקבוע את הצורך במחקר כזה. גם פענוח ניתוח ה-PCR דורש גישה מקצועית. פעל לפי עצת הרופא שלך ואל תעבור בדיקות שאינך צריך.
